共創共贏
蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素是一種耐熱環狀肽類毒素，廣泛分布于谷物、乳制品、油脂及營養強化劑等食品中，具有理化性質穩定、耐熱性強、不易被常規食品加工工藝降解等特點。嬰幼兒配方奶粉是嬰幼兒生長發育的主要營養來源，生產過程中通常添加花生四烯酸(ARA)等功能性油脂。此類油脂原料在生產、儲存及復配過程中易受環境微生物污染，存在引入蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素的潛在風險。該毒素可誘發急性e xin、嘔吐等食物中毒癥狀，而嬰幼兒機體免疫力較低，對毒素更為敏感，受害風險更高。因此，建立靈敏、準確、穩定的檢測方法，對防控嬰幼兒配方奶粉安全風險、保障嬰幼兒飲食健康具有重要現實意義。
目前，食品中蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素的檢測以儀器分析法為主。其中，液相色譜-串聯質譜法(LC-MS/MS)兼具靈敏度高、特異性強、抗基質干擾能力好等優勢，適用于復雜食品基質中生物毒素的精準定量檢測。本研究參照T/WSJD 57-2024《食品中蠟樣芽胞桿菌嘔吐毒素的測定》團體標準，以嬰幼兒配方奶粉和花生四烯酸為研究對象，采用乙腈進行樣品提取，結合ProElut® PLS-A 200mg/6mL(Cat.#: 65932)固相萃取柱凈化，選用迪馬科技Endeavorsil® C18 50x2.1mm，1.8μm (Cat.#：87002)色譜柱分離，建立嬰幼兒配方奶粉和花生四烯酸中蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素的LC-MS/MS 檢測方法。
結果表明: 該方法定量限可達0.1μg/kg，樣品加標回收率為90%~100%，方法靈敏度高、準確度好，符合檢測技術要求。本方法可應用于嬰幼兒配方奶粉的日常風險監測、原輔材料質量把控，同時可為食品安全監管及相關標準制定提供技術支撐，有效保障嬰幼兒食品安全。
本方案適用于奶粉、花生四烯酸等食品中蠟樣芽胞桿菌嘔吐毒素的測定，定量限為0.1μg/kg。
(1) 蠟樣芽胞桿菌嘔吐毒素標準儲備液：濃度為100μg/mL(Cat.#: 48955)；
(2) 蠟樣芽胞桿菌嘔吐毒素工作液 I: 量取定量儲備液，用乙腈溶解，配置成濃度為0.1μg/mL工作液；
(3) 蠟樣芽胞桿菌嘔吐毒素工作液II: 量取定量工作液I，用乙腈溶解，配置成濃度為0.005μg/mL工作液；
(4) 13C6-蠟樣芽胞桿菌嘔吐毒素內標儲備液：濃度為20μg/mL(Cat.#: 48956)；
(5) 13C6-蠟樣芽胞桿菌嘔吐毒素內標工作液：量取定量內標儲備液，用乙腈溶解，配置成濃度為0.1μg/mL內標工作液；
(6) 標準系列工作溶液：準確吸取相應標準工作液和20μL內標工作液，用50%乙腈水定容到1mL，現用現配。
稱取1g樣品于15mL離心管中，加入內標工作液20μL，靜置30min，加5mL乙腈，渦旋混勻30s，超聲30min。8000r/min離心5min。轉移全部上清液至另一離心管中，加入5mL水，渦旋混勻30s，待凈化。
ProElut® PLS-A 200mg/6mL(Cat.#: 65932)
(1)活化：用3mL甲醇、3mL水活化；
(2)上樣：備用液上樣，棄去流出液；
(3)淋洗：用3mL水淋洗，并用洗耳球吹掃固相萃取柱至近干；
(4)洗脫：加入5mL甲醇溶液洗脫，收集洗脫液；
(5)重新溶解：將洗脫液在40℃水浴下氮吹至0.5mL左右，用乙腈定容至1.0mL，混勻，過0.22μm尼龍膜(Cat.#: 37177)，上機分析。
UPLC條件
色譜柱: Endeavorsil® C18，50 x 2.1mm，1.8μm (Cat.#：87002)
流速：0.45mL/min
進樣量：5μL
柱溫：40℃
流動相：A: 0.1%甲酸2mmol/L乙酸銨水溶液 B: 0.1%甲酸乙腈
梯度設置：
質譜條件
電離模式: ESI
掃描方式: 正離子掃描
檢測方式: 多反應監測
電噴霧電壓: 5500V
霧化氣壓力: 50psi
輔助氣壓力: 50psi
氣簾氣壓力: 20psi
離子源溫度: 500℃
下載方案